ЛЕФЛЕРА МЕТОДЫ ОКРАСКИ

ЛЕФЛЕРА МЕТОДЫ ОКРАСКИ
ЛЕФЛЕРА МЕТОДЫ ОКРАСКИ, СРЕДЫ.— 1. Генцианвиолет, или метилвио-л е т. К 100 см3 свежеприготовленной 1%-ной или 2 %-ной карболовой воды добавляется 10 см3 насыщенного спиртового раствора генцианвиолета или метилвиолета (6 В или BN). Красящая способность усиливается от добавления 1 см3 алкогольного раствора метиленовой синьки на каждые 10 см3 указанного раствора метилвиолета. Распространенная краска для окрашивания бактерий.—2. Л. модификация способа Г р а м а. Окрашивают объект в указанном растворе метил- или генцианвиолета 10 мин., промывают в воде, иодируют 2 минуты в Люголевском растворе, погружают на 1 мин. в 5%-ный водный раствор серной или азотной к-ты (или на 10 сек. в 3%-ный раствор соляной), обесцвечивают в абсолютном алкоголе. Ксилол. Канадский бальзам. Способ применяется для окраски бактерий в тканевых срезах.—3. Метиленовая синька. К 30 см3 насыщенного алкогольного раствора метиленовой синьки добавляется 100 см3 0,01%-ного раствора КОН (на 100 см3 дестил. воды 1 см3 1%-ного раствора КОН). Одна из распространенных в бактериологии красок для окрашивания бактерий в мазках, содержащих клеточные элементы; бактерии окрашиваются сильнее, нежели фон из клеточных элементов.—4. Окраска гонококков, а) Фиксация препаратов течение 40 мин. в смеси спирта и эфира (аа); б) окрашивание в течение 1 минуты при легком нагревании в растворе из 4 частей раствора 2,5 г буры иг 1 г метиленовой синьки в 100 см3 дестил. воды, 1 части полихром-ной метиленовой синьки Unna и 5 частей 0,05%-ного водного раствора Bromeosin extra В или extra A. G. (Hochst); в) промывание водой; г) обесцвечивание в растворе из 177 частей 95°-ного спирта, 20 частей 1°/о0-ного раствора бром-эозина и 3 частей уксусной кислоты; д) промывание водой, высушивание.—Клетки бледнорозового цвета, ядра—бледносинего, гонококки—темносинего. 5. Окраска дифтерийных бац и л. а) Фиксация на легком пламени; б) окрашивание в течение 10 сек. в растворе из 4 частей раствора буры и метиленовой синьки (2,5 г буры + 1 г метилен, синьки + 100 см3 дестил. воды), 1 ч. полихромной метиленовой синьки (Griibler), 5 частей 0,05%-ного раствора Bromeosin extra A. G. (Hochst); в)  промывание водой; г) обесцвечивание в течение 10 сек. в растворе из смеси 500 см3 25%-ной уксусной к-ты, в к-рой растворен 0,01 г Tropaeolin 00, и 500 см3 спиртового раствора бисмаркбрауна (1 г бисмаркбрауна на 500 см3 Alcohol, absolut.); д) промывание водой, высушивание. Зерна дифтерийных бацил окрашиваются в черный цвет.— 6. Окраска жгутиков. Протрава: 10 см3 20 %-ного водного раствора танина вмешиваются с 5 еж3 насыщенного на холоду раствора сернокислого железа или аммиачных квасцов; добавляется 1 см3 водного или спиртового раствора фуксина, ме-тилвиолета или Wollschwarz.—б к р а ш и-в а н и е. а) Фиксация троекратным проведением через пламя; б) протрава в течение */*—1 мин. с нагреванием до появления паров (по мнению др. авторов необходимо протравить 3—4 раза по 10 сек., смывая в промежутках протраву водой); в) промывание сильной струей воды; г) промывание спиртом для удаления осадка; д) окрашивание в течение 3—4 мин. анилиноводным фуксином •с нагреванием (обычный раствор краски подщелачивается добавлением 1 см31 %-ного раствора NaOH на каждые 100 см3 краски; щелочь можно добавлять и в большем количестве—до начала помутнения раствора); необходимо пользоваться свежим раствором; для окрашивания можно применять концентрированный карболовый фуксин или спиртоводный фуксин; е) промывание водой, высушивание. Указанный способ весьма рекомендуется для окраски жгутиков группы coli-typhus, больших спирил, рго-teus, группы сенной палочки; для окраски холерных и других вибрионов более пригоден способ Цетнова (Zettnow). Способ Леф-лера может применяться для окраски бактериальных капсул.—7. Антиформин-х л ор о формный метод'* обнаружения туб. бацил. Мокрота смешивается с равным количеством 50%-ного антифор-мина, кипятится; прибавляют к 10 см3 раствора 1,5 см3 10 %-ного раствора хлороформа в спирте, энергично встряхивают, центрифугируют 15 минут. Берут пастеровской пипеткой образовавшийся между хлороформом и антиформином слой, размешивают с небольшим количеством белкового раствора на стекле, фиксируют и красят.—8. Окраска сапных бацил. а) Фиксация троекратным проведением препарата через пламя; б) окрашивание в течение 5 мин. в щелочном растворе метиленовой синьки; в) обесцвечивание погружением в 1%-ную уксусную кислоту, имеющую цвет белого вина от добавления водного раствора Tropaeolin'а; г)  промывание дестил. водой; высушивание. От воздействия тропеолина происходит обесцвечивание клеточной плазмы и отчасти ядер, бактерии же не обесцвечиваются. 9. Окрашенные среды для ди-ференциального диагноза с о 1 i-typhus групп ы.—Ж ид кие среды. а) Среда для Вас. t у phi: в 800 см3 дест. воды растворяют при нагревании 40 г сухого пептона и 20 г виноградного сахара; добавляют 30 ем3 нормального раствора КОН и 200 см3 воды, в к-рых размешивается предварительно 20 г нутрозы; затем всыпается 100 г молочного сахара. Среда разливается в колбы объемом в 100 см3 и 3 дня подряд стерилизуется текучим паром по 20 мин. Перед употреблением на 100 см3 охлажденной среды добавляется 1 см3 стерилизованного 0,2%-ного водного раствора ма-лахитгрюна, после чего среда стерильно разливается по 4—5 см3 в пробирки, б) С р е-да для Вас. paratyphi приготовляется, как предыдущая, но без добавления виноградного сахара. В тифозной среде (а) Вас. enteritidis, Вас. paratyphi А и В и coli-бактерии через 24 часа вызывают брожение, заметное благодаря появлению в верхнем слое среды зеленого пенистого кольца; ну-троза при этом выпадает в виде грязных хлопьев. Вас. typhi дает полное свертывание, как в молоке; над свертком—прозрачная зеленая жидкость. В паратифозной среде (б) Bact. coli вызывает брожение с образованием пены, Вас. typhi и paratyphi А не изменяют среды, Вас. paratyphi В и Вас. enteritidis не вызывают брожения, но медленно обесцвечивают среду.—М одифика-ции (Лефлер) среды. 1. К 100 см3 паратифозной среды (б) добавляется 1 см3 0,2%-ного раствора сафранина (Grubler). Среда приобретает тогда серо-фиолетовый цвет. Bact. coli вызывает брожение, Вас. typhi и Вас. paratyphi А дают более темную окраску среды, от Вас. paratyphi В среда приобретает яркий светлокрасный цвет (редукция малахитгрюна). 2. К обеим средам и б) добавляется на каждые 100 см3 1 см3 0,2%-ного раствора сафранина, 2 см3 0,2%-ного раствора малахитгрюна и 3 см3 1 %-ного раствора Reinblau. В растворе (а) с виноградным сахаром через 24 часа Вас. typhi вызывает сине-фиолетовое окрашивание и выпадение синего осадка; Вас. paratyphi А—слабое брожение и помутнение среды; Вас. paratyphi В—сильное брожение и сине-красное окрашивание среды; Вас. Gartner'a мышиного тифа, Bact. coli—сильное брожение и сине-красное окрашивание; Bact. paracoli—образование синего осадка. 3. На каждые 100 см3 обеих сред (а и б) добавляется по 1 см3 0,2%-ного раствора сафранина и по 3 см3 1 %-ного раствора Reinblau. Вас. typhi и paratyphi А дают в среде а образование синего осадка, среду б окрашивают в темнофиолетовый цвет; через 36 часов Вас. typhi дает землянично-красное окрашивание, Вас. paratyphi A— фиолетово-синее; Вас. paratyphi В, Вас. Gartner 'а мышиного тифа вызывают брожение и выпадение осадка—синего в среде й и землянично-красного в среде б; Bact. coli вызывает такое же изменение среды а, брожение, окрашивание среды и образование фиолетового осадка в среде б. Твердые среды. Описанные ниже среды, окрашенные малахитгрюном, обладают способностью задерживать рост Bact. coli и ряда образующих щелочь бактерий; до нек-рой степени происходит и подавление роста Вас. typhi, однако через 24 часа последняя дает на агаре образование мелких прозрачных колоний, превращающихся через 2—4 дня в большие колонии, окрашиваюL щие среду в желтоватый цвет.—М а л а X и т- грюн-агар. К 5л бульона (1 кг бычьего или лошадиного мяса на 5 л воды) добавляется. 150 г измельченного агара, смесь варится в течение 1/2 часа. В случае плохого растворения агара добавляется 35 см3 нормальной НС1, к-рые после растворения нейтрализуются 35 см3 нормального раствора NaOH. Далее среда нейтрализуется содой по лакмусу, затем снова подщелачивается добавлением 25 см3 нормального раствора соды и доводится до кипения. В кипящую жидкость добавляется 500 см3 10%-ного раствора ну-трозы; после нового вскипания горячая жидкость разливается в полулитровые колбы, и среда стерилизуется 2 дня подряд по 2 часа в Коховском аппарате. Прозрачный агар сливается с образовавшегося на дне осадка. На каждые 100 см3 растопленного до жидкого состояния и охлажденного до 50° агара стерильно добавляется 1,5 см3 0,2%-ного раствора химически чистого малахитгрюна на стерилизованной воде. Окрашенный агар разливается в чашки Петри.—М а л а х и т-г р ю н-ж е л а т и н а. 1х/2 кг чистого измельченного бычьего мяса заливается 5 л воды, добавляется 750 г (15%) желатины, 50 г (1%) сухого пептона Витте и 25 г (0,5%) NaCl. Смесь медленно нагревается до полного растворения желатины, после чего варится в течение 3/4 часа. Горячая жидкость нейтрализуется содой по лакмусу. снова доводится до кипения, затем фильтруется. Получается прозрачная золотисто-желтая жидкость. На каждые 100 см3 такой желатины добавляется 3 см3 двунормалыюй фосфорной к-ты и 2 см3 2%-ного раствора малахитгрюна на стерилизованной воде.—■ Малахитгрюн- Reinblau - сафранин-агар. 1 кг измельченного бычьего мяса заливается 5 л воды, кипятится в течение 1 часа, фильтруется, доводится водой до объема в 5 л. К бульону добавляется 150 г (3%) измельченного агара, после чего смесь нагревается до его растворения. Среда нейтрализуется насыщенным раствором соды по лакмусу (чувствительная лакмусовая бумага должна при этом давать: синяя—тем-нофиолетовое пятно, а красная—слабо голубое). После нейтрализации добавляется 25 см3 нормального раствора соды. Среда снова доводится до кипения, к ней добавляют 50 г нутрозы, медленно всыпанных в 500 см3 воды t° в 70°. После нового вскипания среда разливается в полулитровые колбы иенско-го стекла и стерилизуется 2 дня подряд по 2 часа в Коховском аппарате; оставляется в аппарате до охлаждения. На дне колб образуется осадок, агар над ним должен быть прозрачным и обладать светлой желтовато-белой окраской. Появление коричневой окраски указывает на чрезмерное добавление щелочи, подавляющее рост тифозных бактерий. Перед употреблением колба с агаром нагревается в течение одного часа в Коховском аппарате; на каждые 100 см3 прозрачного, полученного сливанием и охлажденного до 45° агара стерильно добавляется: а) 3 см3 стерилизованной и профильтрованной бычьей желчи; б) 1 см3 0,2%-ного стерильного водного расгвора сг.франина (Grtibler); в) 3 см3 1%-ного стерильного водного раствора Reinblau^ (двойной крепости) (Hochst); г) 3—4 см3 0,2%-ного стерильного водного раствора малахитгрюна. После тщательного размешивания среда разливается в чашки Петри. Готовая среда обладает синей окраской с сине-фиолетовым оттенком в падающем свете. 10. Сывороточная среда. Элективная сывороточная среда, предложенная Л. для дифтерийных палочек, приготовляется из 3 частей телячьей или бараньей сыворотки и 1 части нейтрального 1 %-ного сахарного бульона. Указанная смесь разливается в пробирки, к-рым придают наклонное положение, или чашки Петри и нагревается в аппарате для свертывания по 2 часа 3 дня подряд при t° 90—95°. Смесь от нагревания свертывается, и образуется твердая питательная среда. Нагревание необходимо производить медленно во избежание образования на среде пены или пузырьков, ни в коем; случае не допуская закипания находящейся в приборе воды. Сыворотка, содержащая кровяной пигмент, окрашивает среду в сероватый цвет вместо требуемого цвета слоновой кости. Применение щелочного сахарного бульона делает среду мягкой и сообщает ей коричневую окраску. Лит.: Loeffler F., Eine neue Methode zum Farben d. Mikroorganismen, im besonderen ihrer Wim-perbaare u. Geisseln, Zentralbl. f. Bakteriologie, B. VI,. 1889; о н ж e, Weitere Untersuchungen tiber die Bei-zung und Farbung d. Geisseln bei den Bakterien, ibid.,. B. VII, 1890; он же, Der kulturelle Nachweis der Typliusbazillen in Faeces, Erde u. Wasser rait Hilfe d. Malachitgriins, Deutsche medizinisdij Worn-п-schr ft, 1906,№ 8; о н ж е, Neue Verfahren zur Schnell-farbung von Mikroorganismen, insbesondere d. Blutpa-rasiten, Spirocbaten, Gonococcen und Diphtheriebazil-len, ibid., 1907, № 5; он ж е, Zum Nachweis und zur Differentialdiagnose d. Typhusbazillen mittels der Malachitgriinnahrbcden, ibid., 1907, № 39; он же,. Ein neues Verfahren zum Nachweis u. zur Differentialdiagnose der Typhusbakterien mittels Malacb.it-griin-Safranin-Reinblau Niihrbudcn', ibid., 1909, № 30; о н ж e, Ein neues Anreicherungsverfahren zum farbe-rischen Nachweis sparlicher Tuberkelbazillen, ibid., 1910, № 43.                                              В. Калинин*.

Большая медицинская энциклопедия. 1970.

Поможем сделать НИР

Полезное


Смотреть что такое "ЛЕФЛЕРА МЕТОДЫ ОКРАСКИ" в других словарях:

  • НЕЙСЕРА МЕТОДЫ — окраски; важнейшее значение имеют 1) метод окраски дифтерийных бацил и 2) метод окраски гонококков. Для окраски дифтерийных бацил, особенно в свежих (10 24 часовых) культурах, берутся две краски: для приготовления первой растворяют 0,1 ме… …   Большая медицинская энциклопедия

  • ОКРАСКА — (микроорганизмов). Мазок на предметном или покровном стекле высушивается на воздухе; высушивание над пламенем не рекомендуется, допускается лишь помещение препарата вблизи пламени. Высушенный препарат фиксируется троекратным проведением через… …   Большая медицинская энциклопедия

  • БАКТЕРИОЛОГИЯ — БАКТЕРИОЛОГИЯ. Содержание: I. Отделы бактериологии.......... 696 II. История бактериологии, главнейшие этапы ее развития............. 697 III. Методы разработка, преподавание и прак тическое значение............ 703 IV. Институты и лаборатории …   Большая медицинская энциклопедия

  • БРЮШНОЙ ТИФ — БРЮШНОЙ ТИФ. Содержание: Этиология................... 160 Эпидемиология................. 164 Статистика................... 167 Патологическая анатомия........... 187 Патогенез................... 193 Клиническая картина............. 195 Осложнения …   Большая медицинская энциклопедия


Поделиться ссылкой на выделенное

Прямая ссылка:
Нажмите правой клавишей мыши и выберите «Копировать ссылку»